Среди иммунологических методов индикации бактериаль­ных антигенов встречный иммуноэлектрофорез (ВИЭФ), ла­текс-агглютинация (ЛА) и коагглютинация (КОА) привле­кают простотой выполнения, высокой чувствительностью и специфичностью.

Преимущества метода ВИЭФ перед бактериологическим заключаются в быстроте получения результата (1—3 ч), вы­сокой специфичности и чувствительности теста [23]. При ана­лизе биосубстратов от больных пневмококковой пневмонией иммунологическими методами разным авторам удалось вы­явить пневмококковый антиген в 3—76% случаев в крови, 23—79 — в мокроте, 5—59,5 — в моче и 14 — 86%—в плев­ральном экссудате [28].

Метод ВИЭФ в этиологической диагностике. Для выясне­ния пригодности различных биосубстратов для индикации в них бактериальных антигенов методом ВИЭФ мы исследо­вали сыворотку крови, мочу и плевральный экссудат.

При исследовании методом ВИЭФ 103 неконцентрирован­ных сывороток от больных пневмонией и плевритом пневмо­кокковый антиген не обнаруживался ни разу. Даже в сыво­ротке ребенка с пневмококковой бактериемией реакция ВИЭФ с пневмококковой omni-сывороткой была отрицатель­ной. Концентрирование 5 сывороток на концентраторе Mini-con-25 (в 5—7 раз) не повлияло на выявление пневмококко­вого антигена. Считая одной из причин низкой концентрации антигена в сыворотке крови его связывание в иммунные комплексы, мы расщепили ЦИК в 6 образцах, обработав их цистеином. В результате обработки пневмококковый антиген был найден методом ВИЭФ только в 1 из 6 исследованных сывороток.

Антиген палочки инфлюэнцы выявляли в 120 сыворотках крови. Капсульный антиген палочки инфлюэнцы типа b об­наружен в 5 (4,1%) образцах крови, полученных от 3 детей (у 2 возбудитель был выделен из плевральной жидкости и в ней же определялся капсульный антиген, у 3-го ребенка был найден только антиген в плевральном экссудате без высева).

Из 5 положительных реакций ВИЭФ 1 была получена только после 7-кратной концентрации сыворотки крови- В других сыворотках содержание капсульного полисахарида было значительно выше и положительную реакцию ВИЭФ регистрировали в разведениях образца 1:10—1:80.

Таким образом, в сыворотках крови детей, больных пнев­монией, методом ВИЭФ капсульные антигены выявить удает­ся редко, и этот метод уступает по чувствительности методу посева.

Для индикации бактериальных антигенов в моче было проведено 148 исследований концентрированной в 50 раз мочи, полученной от 56 больных пневмонией и плев­ритом (табл. 18). Концентрирование мочи значительно ска­зывалось на частоте обнаружения пневмококкового антигена: из 19 положительно реагировавших в реакции ВИЭФ кон­центрированных образцов мочи число положительных нахо­док в неконцентрированном материале было всего 7, т. е в 2,7 раза меньше.

Таблица 18

Частота обнаружения капсульных антигенов пневмококка и палочки инфлюэнцы в моче больных пневмонией и плевритом методом ВИЭФ

Всего                                56            14         25,0       50                     3 6,0

Частота пневмококковой антигенурии зависела также от клинической формы легочно-плеврального воспаления: у больных пневмонией, осложненной плевритом, антиген опре­делялся почти в 50% случаев, в то время как при неосложненной пневмонии — только в 6,5%.

Длительность антигенурии у больных пневмонией, ослож­ненной плевритом, достигала 1—3 нед., но у 2 больных гнойным плевритом антиген пневмококка выявлялся на про­тяжении 45—50 дней.

При анализе результатов, реакции ВИЭФ с капсульными антигемофильными сыворотками (poly, b), антиген палочки инфлюэнцы найден у 6% детей. В 2 из 3 случаев гемофильная этиология подтверждена исследованием плеврального экссудата.

Реакция ВИЭФ в моче была всегда специфичной. Однако у больных неосложненной пневмонией антигенурия выявляется этим методом в единичных случаях и, следовательно, как диагностический тест у этой группы больных он недоста­точно информативен. Его положительный результат при плев­ритах мало что добавляет к расшифровке этиологии метода­ми исследования плеврального экссудата.

Плевральный экссудат, довольно часто сопровождающий воспалительный процесс в легком, является наиболее адек­ватным биоматериалом для поиска бактериальных антиге­нов при осложненных формах пневмонии.

В реакции ВИЭФ с пневмококковой omni-сывороткой ис­следовано 328 образцов плеврального экссудата от 272 боль­ных плевритом. Пневмококковый антиген методом ВИЭФ обнаружен в 40,5% проб плеврального экссудата, или у 37,1% больных плевритом.

Наши исследования (табл. 19) свидетельствуют о высо­кой чувствительности и специфичности этого метода, даю­щего лишь единичные ложноположительные результаты.

Таблица 19

Чувствительность и специфичность метода ВИЭФ в плевральном экссудате

Всего с иной           2                  0          42/100%                                     237                3     234/100%

этиологией

Интересна динамика антигена в пробах плеврального экссудата. Уже в первые 3 дня лечения антибиотиками рез­ко снижается высев пневмококка, в этот срок реакция ВИЭФ чаще всего остается положительной (на 2—4-й день в 77% проб). В течение 1—2 недель пневмококковый анти­ген еще определялся у половины обследованных детей, и даже через 3 недели мы обнаруживали его в 1 из 3 проб жидкости, что очень важно для диагностики.

Нам не удалось проследить динамику обнаружения анти­гена палочки инфлюэнцы в плевральном экссудате, посколь­ку при гемофильной этиологии плеврита редко имеются по­казания для повторных пункций плевральной полости: у 1 ребенка антиген был выявлен через 4 дня от начала ле­чения.

В реакции латекс-агглютинации для выявления пневмо­коккового антигена в плевральной жидкости используют частицы латекса, сенсибилизированного сывороткой против пневмококков. Исследовано 320 проб плеврального экссуда­та, полученного от 275 детей. При исключении проб от детей с иной этиологией плеврита положительная реакция Л А на пневмококковый антиген определялась у 140 (59,8%) боль­ных плевритом, причем чувствительность и специфичность метода весьма высоки (табл. 20).

Таблица 20

Результаты реакции ЛА для выявления пневмококкового антигена в плевральном экссудате

Всего с иной этиологией                        49                     2                30/93,7%

Ложноположительные реакции агглютинации сенсибили­зированного латекса были отмечены в 2 (6,4%) случаях при высеве из густого гнойного экссудата палочки инфлю­энцы (1—тип b и 1—бескапсульная форма палочки ин­флюэнцы).

Диагностическая ценность реакции ЛА в установлении этиологии пневмококкового плеврита при начавшейся антибиотикотерапии близка таковой реакции ВИЭФ. Пневмокок­ковый антиген реакцией ЛА обнаруживался у всех больных при исследовании через сутки, у 80% — через 2—4 дня и в 4 из 5 исследованных проб — через 8—10 дней.

Следует оговорить, что постановка теста ЛА всегда дол­жна сопровождаться исследованием контрольного реагента-латекса, обработанного неиммунной сывороткой. Агглюти­нация контрольного латекса наблюдалась нами в 18,8% проб, что требовало постановки реакции ВИЭФ.